Sisu

• Juhised

Kõrgema taseme mikrobioloogias osalemisel võib teie õpetaja nõuda, et te täidaksite projekti, mille käigus tuleb testide seeria kaudu tuvastada tundmatu bakter. Selle bakteri nõuetekohaseks identifitseerimiseks on vaja kogu nõuetekohast laboriseadet ja tunda erinevaid laboratoorseid protseduure. Samuti on kasulik bakterite vooskeem ja nende laborikatsed, et saaksite tuvastada bakterid.

Juhised

Kultuuriplaadid võimaldavad isoleerida baktereid, et kergesti tuvastada nende omadused (Hemera Technologies / Photos.com / Getty Images)

1. Valmistage kõik katsed enne katse algust. See hõlmab agarplaatide ja -torude valmistamist ning vajalike indikaatorite, näiteks Kovaci reaktiivi valmistamist. Märgistage kõik torud ja plaadid sobivalt, et nad ei seguks, põhjustades vigaseid tulemusi.

2. Külvage oma bakterid. See määrab teie bakteri kuju ja värvi, näiteks grampositiivne (lilla), gramnegatiivne (punane või roosa), kookospähklid (ümmargused), spirokeetid (spiraal) või vardad. Bakteri külvamiseks on vaja puhast puhast tera, vett, kristallilist violetti, joodi, valgendit, safraniini, absorbeerivat paberit, valgusmikroskoopi ja mõnda paberit. Pärast silindri lohistamist kasutage seda tera tilgakese asetamiseks. Lükake silmus uuesti ja asetage seejärel väike kogus tundmatut bakterit veepiirasse. Viige tera leeki peale paar korda, et bakterid kuivaks ja täielikult kinnitada. Katke see kristalliseeritud violetiga, jäta minutile ja peske seejärel õrnalt. Seejärel katke tera joodiga. Jätke seista 30 sekundit ja peske seejärel. Liigse vee eemaldamiseks asetage üle tera imav paber. Seejärel valage pleegitaja terale. Viie sekundi pärast peske valgendi eemaldamiseks. Lõpuks katke tera safraniiniga. 40 sekundi pärast peske tera ja kuivatage seda õrnalt paberiga. Asetage pisut õli bakterite kohale slaidil ja vaadake mikroskoobi all. Pange tähele nähtavate bakterite kuju ja värvi.

   
   

3. Testida oksüdaasi oma bakterites. Selleks on vaja paberfiltrit, oksüdaasi reaktiivi, E. coli, Pseudomonas ja selle tundmatuid baktereid. Selles testis on kontrolliks E. coli ja Pseudomonas. Teie bakter peab olema selle testi jaoks vähem kui 24 tundi vana. Paigaldage käepide ja asetage väike kogus iga bakterit paberifiltrile. Kasutage tilgutit, et panna üks tilk reaktiivi oksüdaasi igasse bakterisse. 10 sekundi pärast märkige ära iga bakteri värvus. E. coli annab positiivse tulemuse ja Pseudomonas annab negatiivse tulemuse. Tsütokroomi oksüdaasi ensüümi suhtes positiivsed bakterid muutuvad lilla ja negatiivsed bakterid ei muuda värvi.

4. Vesiniksulfiidi (SIM) test. Nihutage käepidet ja kasutage seda, et võtta plaadilt mõned bakterid. Inokuleerige SIM-toru oma bakteritega ja katke see. Jätke see toru ahjus 18–24 tundi temperatuuril 37 ° C. Tuvastage, kas teie bakter on mobiilne (on flagellum). Kui baktereid inokuleerite kaugel, on see liikuv. Seejärel asetage katseklaasi kaks tilka Kovaci reaktiivi. Kui selle värvus muutub punaseks või roosaks, on selle bakter selle testi jaoks positiivne ja sisaldab trüptofaani, olles seega indooli tootja. Kui toru muutub mustaks, tekitavad selle bakterid vesiniksulfiidi.

   
   

5. Tehke Simmon tsitraadi test. Inokuleerige bakterid Simmoni agariga kahes katseklaasis. Jätke need ahjus 18-24 tundi 37 ° C juures. Agar on esialgu roheline, kuid kui teie bakterid kasutavad süsinikuallikana tsitraati, muutub värv rohelisest siniseks. Sinine on positiivne tulemus. Kui katseklaasid jäävad roheliseks, on nende bakterid tsitraadi kui ühe süsinikuallika kasutamisel negatiivsed.

6. Tehke metüülpunane test (MRVP). Selle testi jaoks on vaja kahte katseklaasi, mis sisaldavad peptooni, puhvrite ja dekstroosi (või glükoosi) lahust. Iga katseklaas nakatatakse tundmatute bakteritega ja pöörduge tagasi ahju 18 kuni 24 tundi temperatuuril 37 ° C. Kui olete valmis, lisage katseklaasi kolm tilka metüülpunast. See on teie MR-toru. Kui toru muutub kollasest punaseks, on selle bakter positiivne ja fermentatsiooni käigus kasutatakse segatud happeliini (toodetakse piimhappe, äädikhappe ja sipelghappeid). Teises tuubis lisatakse kolm tilka VP reaktiivi. Kui toru muutub punaseks, on bakterid positiivsed diatsetüüli, fermentatsiooniprodukti, moodustumise suhtes. Kui toru muutub pruuniks, on teie bakter negatiivne.

7. Leidke oma bakterid, märkides vooskeemi positiivseid ja negatiivseid tulemusi.