Sisu
Külma alkoholi kasutatakse DNA eraldamiseks veepõhistest lahustest, võimaldades seda puhastada järgnevaks geneetiliseks testimiseks. Alkoholi lisamine DNA-d sisaldavale lahusele on lihtne viis selle puhastamiseks madalamatel temperatuuridel ja aeglustada seda lagundavaid ensüüme, andes paremad ekstraheerimise tulemused.
Rakkude seinte katkestamine
Ekstraktsiooniprotseduurid puhta DNA saamiseks peavad vabanema kõigist selle koe molekulaarsetest ja keemilistest komponentidest, millest DNA ekstraheeritakse. Esimesed sammud hõlmavad rakuseinte hävitamist. Seda saab teha erinevate keemiliste mõjuritega, mis on rakumembraanidele söövitavad, kuid ei kahjusta DNA-d. Rakke võib samuti ultraheliga töödelda, homogeniseerida või jahvatada membraanide hävitamiseks.
Lipiidide eemaldamine
Kui rakuseinad on hävitatud, lisatakse raku membraane moodustavate rasvade ja õlide eemaldamiseks pesuvahend. Detergendid põhjustavad õlide ja rasvade lahustumist lahuses.
Valkude eemaldamine
Valke ja ensüüme saab lõhustada, lisades lahusele proteaasi. Proteaasid lagundavad valgud väikesteks peptiidideks ja aminohapeteks.
Sadestav DNA
Jääkülma alkoholi lisamine lahusele sadestab ja koondab DNA. Geneetilist materjali võib koguda proovi tsentrifuugimisega ja vedeliku kihi dekanteerimisega. See peaks olema tsentrifuugitoru põhjas väike sette.
Puhastav DNA
DNA võib pesta, suspendeerides uuesti külma alkoholi lahuses ja tsentrifuugitakse uuesti mitu korda, et saada väga puhas proov. Tüüpilised alkoholid hõlmavad etanooli ja isopropanooli. See protsess jätab väga puhtaks prooviks rangetes testides.
