Sisu
Kõrgefektiivne vedelikkromatograafia (HPLC) on vahend, mida kasutatakse ainete segust eraldamiseks. Teatud kemikaalide eraldamine ja identifitseerimine toimub peamiselt süsteemi kromatograafiakolonnis. CLAE jaoks on saadaval palju veerutüüpe ja kumbagi neist kasutatakse teatud tüüpi analüüside jaoks. Kolonn C18 on kõige tugevam mittepolaarne tavaliselt kasutatav osa. Pärast pikaajalist pidevat kasutamist lahusti voolukiirus läbi selle väheneb ja analüüsi aeg pikeneb. Analüüsi aja vähenemise teine põhjus on proovide olemasolu, mis jätavad kolonni materjali väikeses koguses kemikaale, vähendades nende eraldamise võimet. Selle pinna saab taastada, töödeldes materjali rea spetsiifiliste lahustitega, et puhastada see ülejäänud proovidest ja taaselustada tugimaterjal.
Samm 1
Eemaldage veerg C18 voolu suunast ja asetage see vastassuunas. Lahusti tagasivool läbi selle leevendab aja jooksul tekkivat akumulatsiooniefekti. Tuleb jälgida, et kolonni lõppu ei jääks liiga palju materjali. Mõni tehas kasutab ülaosas suuremat silma, nii et kui voolu suund muutub, on võrk allpool asuvas asendis. Seda taastamismeetodit nimetatakse voolu ümberpööramiseks. Et vältida kogunemise voolu süsteemi detektorisse ja võimaliku obstruktsiooni tekitamist, laske sellel töötada ilma detektorita ja suunake vool kolonnist kõrvaldamiseks.
2. samm
Pange lahusti läbipääsutoru lahustite seeriasse, et elueerida mis tahes kolonni jäänud ühend vastupidises suunas. Need lahustid erinevad oma hüdrofiilsete omaduste poolest. Neid varieerides elueerite sama mitmekesise hüdrofiilse toimega ühendid. Kasutage järjestikku 50 ml järgmistest lahustitest: vesi (kui kasutate puhvrit), metanool, isopropanool, diklorometaan, heksaan, diklorometaan ja isopropanool.
3. samm
Vahetage kolonn õiges suunas ja laske lahustil sellest läbi voolata. Enne jätkamist kasutage selle pesemiseks vähemalt 75 ml. Testige seda mustriga, mida kasutasite uue ajal, ja kontrollige tulemusi. Pöörake tähelepanu maksimaalsete kinnipidamispunktide ja kogu analüüsi aja saavutamisel. Kui palju need atribuudid vastavad esialgsele testile, kui see oli veel uus, näitab veeru taastamise aste. Kui tulemused ei ole rahuldavad, asendage veerg uuega ja visake vana minema.
